高壓氧對腦白質疏松大鼠的神經(jīng)保護作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　腦白質疏松(Leukoaraiosis，LA)是大腦深部的白質脫髓鞘病變，與缺血性腦血管病密切相關，是腦小血管病的主要類型之一。腦小血管病引起的長期慢性低灌注是腦白質損傷的主要原因之一。低灌注可導致腦白質缺血缺氧，而高壓氧治療是糾正缺血缺氧的有效手段。本文通過建立大鼠腦白質疏松模型，觀察高壓氧對腦白質疏松大鼠的神經(jīng)保護作用并探討其作用機制，為高壓氧治療慢性低灌注腦白質病的臨床應用提供依據(jù)。
　　方法：
　　

2、1、動物模型構建:將雄性Wistar大鼠60只，隨機分為3組:假手術組、手術組及術后HBO治療組，每組20只。采用雙側頸總動脈結扎法制作大鼠慢性低灌注腦白質損傷模型，損傷持續(xù)14天，造模完成。
　　2、高壓氧干預:大鼠造模完成后，給予高壓氧治療，治療壓力為2.0ATA，先氧氣洗艙時間10min，然后加壓時間15min，再穩(wěn)壓吸氧60min，最后減壓時間15min，艙內溫度（23.3±2）℃。1次/天，共14次。
　　3、檢測

3、指標:
　　3.1行為學檢測:術后14天腦白質損傷形成，術后行定位航行試驗，檢測學習和空間記憶能力的變化。
　　3.2組織染色及免疫組化:術后28天（高壓氧治療14天后），福爾馬林灌注取腦，分離其海馬組織，HE染色觀察大鼠海馬形態(tài)結構，TUNEL染色，觀察神經(jīng)細胞凋亡情況。少突膠質細胞的凋亡是腦白質疏松髓鞘損傷的重要指標，免疫熒光染色觀察各組髓鞘堿性蛋白（MBP）、少突膠質細胞標記物(CC1)、少突膠質細胞前體細胞標記物(N

4、G2)的表達。
　　3.3細胞因子及基因蛋白定量檢測:采用Western Blot法和RT-PCR分析分析TNF-α、IL-2、IL-6等炎癥因子的蛋白和mRNA水平。行Western Blot蛋白定量實驗，選用TNF-α下游caspase-3、Akt、Bcl-2蛋白，確定高壓氧作用的信號通路。
　　3.4統(tǒng)計學處理:本實驗計量資料用均數(shù)±標準差表示，采用方差分析進行比較，SNK進行組間差異比較。按α=0.05檢驗水平，p＜

5、0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、行為學方面:雙側頸總動脈結扎14天后行水迷宮實驗，術后14-21天，手術組大鼠的逃避潛伏期明顯高于正常對照組和HBO治療組(p＜0.05);術后21-28天，HBO治療組與手術組比較，逃避潛伏期明顯縮短(p＜0.05)，HBO治療組與正常對照組比較，逃避潛伏期有縮短，但兩者相比無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)
　　2、組織染色及免疫組化:
　　2，1海馬HE染色及TU

6、NEL染色:術后28天，手術組與假手術組比，海馬神經(jīng)元核固縮、深染，胞漿嗜酸性增強，血管周組織間隙增寬;TUNEL染色可見手術組海馬區(qū)域內較多細胞出現(xiàn)胞核棕黃色，即出現(xiàn)凋亡特征。HBO治療組與手術組比，海馬組織結構較為完整，TUNEL陽性細胞明顯減少，即凋亡神經(jīng)元明顯減少。HBO治療組與假手術組比，核固縮與TUNEL陽性細胞水平和數(shù)量基本相同，無明顯差異。
　　2.2MBP、CC1、NG2染色:術后28天取髓鞘蛋白表達最豐富的胼胝

7、體區(qū)進行MBP、CC1、NG2染色，可見手術組較假手術組胼胝體區(qū)MBP明顯減少，NG2增多，CC1減少(p＜0.05)，HBO治療組較手術組MBP增多，NG2減少，CC1增多(p＜0.05)。手術組較假手術組胼胝體區(qū)IL-2、IL-6、TNF-α等炎癥因子均有升高;但HBO治療組較手術組IL-2、IL-6在無顯著差異(p＞0.05)，TNF-α明顯降低(p＜0.05)。RT-PCR結果提示，手術組較假手術組TNF-α，在mRNA水平有明

8、顯增高，HBO治療組較手術組TNF-α在mRNA水平明顯降低。
　　2.3凋亡相關因子及蛋白定量檢測:Western Blot結果顯示手術組caspase-3表達較假手術組高，HBO治療組caspase-3表達較手術組降低(p＜0.05)。手術組Bcl-2和p-Akt表達較假手術組未見明顯異常，高壓氧治療后，Bcl-2和p-Akt表達有明顯升高(p＜0.05)。
　　結論：
　　1、結扎雙側頸總動脈制作低灌注腦白質疏松

9、模型可導致大鼠學習和記憶能力的下降，引起海馬區(qū)損傷，細胞凋亡增多，髓鞘堿性蛋白和少突膠質細胞減少，炎癥因子增多，促凋亡因子增多等。
　　2、高壓氧治療具有減輕海馬損傷，抑制神經(jīng)細胞凋亡作用，對神經(jīng)和膠質細胞有一定的保護作用。
　　3、高壓氧治療可減輕由于慢性腦缺血引起的髓鞘堿性蛋白(MBP)脫失，改善少突膠質細胞進行性減少情況，促進少突膠質細胞前體細胞增生。
　　4、高壓氧對于腦白質損傷的保護作用的可能機制是通過下調T