NDRG2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、NDRG(N-mycdownstream-regulatedgene)基因家族由NDRG1、NDRG2、NDRG3和NDRG4共四個(gè)成員組成，它們?cè)诩?xì)胞增殖和分化方面起重要作用，它們彼此之間有53％-65％的同源性，其中NDRG2基因由我校首先發(fā)現(xiàn)并克隆，其染色體定位于14q11.2，含有16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子，該基因轉(zhuǎn)錄的mRNA全長(zhǎng)為2,024bp,其編碼的蛋白含357個(gè)氨基酸殘基，分子量約為40kDa。目前研究發(fā)現(xiàn)NDRG2在

2、眾多腫瘤組織中低表達(dá)，如肝癌、胰腺癌、甲狀腺癌和腦膜瘤，被認(rèn)為在腫瘤抑制中起一定的作用。我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌及高危腺瘤中NDRG2表達(dá)量明顯低于正常組織,并且隨著Dukes′分級(jí)的增高，NDRG2表達(dá)有下降趨勢(shì)。此外，NDRG2的表達(dá)與結(jié)直腸癌的再發(fā)呈負(fù)相關(guān)，這均提示NDRG2在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程中起著抑制作用。為進(jìn)一步研究NDRG2的功能，分析其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移力的影響，并初步揭示NDRG2抑制侵襲、轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制，我們

3、進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：
　　實(shí)驗(yàn)一
　　NDRG2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的遷移和侵襲力的影響
　　目的:觀察NDRG2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW620侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響，探討其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法：利用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Ndrg2和SiRNA-Ndrg2于SW620細(xì)胞內(nèi)48h，上調(diào)/下調(diào)NDRG2的表達(dá)，同時(shí)以轉(zhuǎn)染pcDNA3.1空載體與siRNA-negtive作為對(duì)照；檢測(cè)NDRG2基因mR

4、NA及蛋白表達(dá)水平的變化；通過劃痕試驗(yàn)及transwell細(xì)胞侵襲試驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)上調(diào)/下調(diào)NDRG2表達(dá)水平后的結(jié)腸癌細(xì)胞遷移和侵襲能力進(jìn)行分析。結(jié)果：pcDNA3.1-Ndrg2轉(zhuǎn)染入SW620細(xì)胞后，NDRG2的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高，細(xì)胞遷移和侵襲能力下降；SiRNA-Ndrg2轉(zhuǎn)染入SW620細(xì)胞后，NDRG2的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低，細(xì)胞遷移和侵襲能力上升；與各自對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論

5、：NDRG2作為抑癌候選基因能夠降低結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲能力。
　　實(shí)驗(yàn)二
　　慢病毒介導(dǎo)NDRG2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW620生長(zhǎng)的影響
　　目的:觀察NDRG2對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW620生長(zhǎng)、細(xì)胞周期調(diào)控等的影響，并探討其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法：利用第二代慢病毒載體系統(tǒng)，將包裝質(zhì)粒psPAX2、包膜質(zhì)粒pMD2．G和載體質(zhì)粒pLenti6.3/V5-DEST-Ndrg2共轉(zhuǎn)染人胚胎腎上皮細(xì)胞系293T細(xì)胞，獲得攜帶NDRG2基