鴨腸炎病毒ul45-,（68aa）-和ul47基因原核表達(dá)及其抗血清中和活性的鑒定.pdf

1、鴨病毒性腸炎(DVE)，又名鴨瘟(DP)是由鴨腸炎病毒(DEV)引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病，其特征是流行廣泛，傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高。鴨腸炎病毒屬于皰疹病毒科，未分類病毒屬。DEV分子生物學(xué)研究落后于其它皰疹病毒，目前其基因組結(jié)構(gòu)和物理圖譜尚屬未知。本研究圍繞DEVUul45和ul47基因，對(duì)其功能進(jìn)行了初步研究。DEVUL45和ULA7編碼外膜蛋白，目前未見有對(duì)其功能研究的報(bào)道。HSV-1UL45蛋

2、白在病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞與細(xì)胞間的融合過程中起關(guān)鍵作用；PrVUL47蛋白對(duì)病毒在細(xì)胞質(zhì)中的組裝過程中起重要作用。BHV-1ULA7蛋白是BHV-1病毒顆粒重要的結(jié)構(gòu)蛋白。 本研究參照GenBank上發(fā)表的基因序列(序列號(hào)為EF153413)，設(shè)計(jì)克隆ul45親水區(qū)68aa.的引物p1/p2，克隆UL47ORF引物p3/p4:以DEV核酸為模板克隆ul45(68aa)與ul47基因。構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-ULul45(68aa)

3、和pMD18-T-ul47之后，構(gòu)建了原核重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-6p-ul45(68aa)和pET30a-ul47，將陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)受體菌Rosetta感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，均獲得原核表達(dá)蛋白。將原核表達(dá)的蛋白進(jìn)行純化，免疫家兔，制備多克隆抗體，測(cè)得兔抗UL45(68aa)和UL47多克隆抗體的瓊擴(kuò)效價(jià)分別為1:8和1:16。利用間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)進(jìn)行UL45和UL47蛋白在感染細(xì)胞中的定位，結(jié)果表明，DEVUL45蛋白