白細胞介素27對胰腺癌細胞生物學行為的影響及機制研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　胰腺癌是一種常見的惡性腫瘤，起病隱匿，發(fā)病迅速，預后極差，除早期手術治療外，其他治療方法收效甚微。腫瘤的生物治療是腫瘤治療的新趨勢，同時也是胰腺癌綜合診治的研究熱點。研究開發(fā)能夠激活宿主的天然免疫防御機制或直接使用天然或基因工程產生的靶向藥物是生物治療的核心。白細胞介素27(Interleukin-27，IL-27)是來源于IL-6/IL-12細胞因子家族的異源二聚體細胞因子，其對不同類型的免疫細胞具有廣泛調

2、節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)IL-27不僅可以通過調節(jié)免疫應答產生抗腫瘤作用，并具有直接殺傷腫瘤細胞的功能。IL-27對于機體的免疫功能具有調節(jié)作用，可以作為潛在的腫瘤免疫治療因子，然而關于IL-27對于胰腺癌的相關作用研究甚少。為了更好的了解IL-27的生物學功能及其對胰腺癌細胞的作用，本研究擬通過探討IL-27對胰腺癌細胞惡性生物學行為可能存在的直接和間接的影響以及可能的作用機制，為IL-27可能成為胰腺癌生物治療新靶點提供理論及實驗依據(jù)。

3、r>　　研究內容:
　　一、檢測IL-27對多株胰腺癌細胞增殖、凋亡及遷移侵襲能力的影響。
　　二、建立巨噬細胞、胰腺癌細胞共培養(yǎng)體系，檢測IL-27是否能通過影響巨噬細胞干預胰腺癌細胞的生物學行為。
　　研究方法:
　　一、利用Real-time PCR及Western blot技術檢測多株胰腺癌細胞中IL-27特異性受體WSX-1的表達情況。IL-27直接作用于胰腺癌細胞后，CCK-8法檢測胰腺癌細胞增殖能力

4、，流式細胞術檢測細胞周期及凋亡情況，利用Transwell法檢測胰腺癌的遷移、侵襲能力。
　　二、采用PMA將人組織淋巴瘤細胞株U937細胞誘導為巨噬細胞(Mψ)，流式細胞檢測巨噬細胞標志物CD68分子的表達情況。采用IL-4將Mψ誘導為M2型巨噬細胞，Real-time PCR檢測M1型巨噬細胞標志物CD86、IL-12p40，M2型巨噬細胞標志物CD206的表達情況，驗證M2型巨噬細胞是否誘導成功。IL-27刺激M2型巨噬細胞

5、，Real-time PCR檢測CD86、IL-12p40、CD206的表達，觀察IL-27對于M2型巨噬細胞表型的影響。建立M2型巨噬細胞/胰腺癌細胞共培養(yǎng)體系，加入IL-27進行刺激，CCK-8檢測胰腺癌細胞增殖能力的變化，流式細胞術檢測細胞周期及凋亡情況，Western blot檢測細胞周期及凋亡相關蛋白的變化。利用Transwell法檢測胰腺癌的遷移、侵襲能力改變。Western blot檢測侵襲相關蛋白，探索可能的作用機制。<

6、br>　　結果:
　　一、多株胰腺癌細胞內WSX-1的表達水平顯著低于脾組織及U937細胞。IL-27對胰腺癌細胞的增殖能力、周期、凋亡、遷移及侵襲能力無明顯的直接作用。
　　二、PMA誘導的U937細胞經流式檢測CD68分子的表達顯著升高，說明巨噬細胞(Mψ)誘導成功。IL-4誘導Mψ為M2型巨噬細胞后，M2型巨噬細胞的CD86、IL-12p40顯著低于Mψ，而CD206顯著高于Mψ，提示M2型巨噬細胞誘導成功。M2型巨噬

7、細胞的IL-27特異性受體WSX-1的表達水平也顯著高于Mψ。IL-27刺激M2型巨噬細胞后，CD86、IL-12p40表達顯著升高，CD206表達顯著降低，提示IL-27可能誘導M2型巨噬細胞向M1型轉化。在M2型巨噬細胞/胰腺癌細胞共培養(yǎng)體系中加入IL-27后，胰腺癌細胞的增殖能力、遷移及侵襲能力顯著下降，吉西他濱誘導的細胞凋亡程度顯著上升。Western blot顯示，在共培養(yǎng)體系中加入IL-27后，胰腺癌細胞的細胞周期相關蛋白C

8、DK4、Cyclin D1表達下降，凋亡相關蛋白Cleaved Caspase-9顯著上調，侵襲轉移相關蛋白p-STAT3，JAK2，vimentin顯著下調。
　　結論:
　　IL-27特異性受體WSX-1在胰腺癌細胞株內表達水平均較低，IL-27無明顯的直接抑制胰腺癌細胞的作用。U937可以在體外誘導為巨噬細胞，利用共培養(yǎng)體系可以研究巨噬細胞與胰腺癌細胞的相互作用，IL-27可以在體外將M2型巨噬細胞向M1型轉化，從而間