PTEN表達下調(diào)對乳腺癌細胞生物學性狀的影響.pdf

1、乳腺癌是我國女性常見的一種惡性腫瘤，抑癌基因的缺失或表達失調(diào)是乳腺癌發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因之一。10號染色體上磷酸酶與張力蛋白同源缺失基因(phosphatase and tensinhology deleted from chromosome10，PTEN)又稱多種進展期癌中病變基因(mutated in multiple advanced cancers，MMACl)或TGF-B調(diào)節(jié)的上皮細胞富含的磷酸酶基因(TGF-reg

2、ulated and epithelialcell-enriched phosphatase1，TEPl)，是1997年由Steck等3個研究小組分別用不同的方法克隆到的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因。該基因定位于10q23.3，廣泛表達于各種正常組織，但在包括乳腺癌的許多腫瘤中表達缺失或降低。
　　 大量研究發(fā)現(xiàn)，PTEN在乳腺發(fā)育及乳腺癌發(fā)生中起重要作用。PTEN表達下調(diào)或者缺失導致乳腺過度發(fā)育并較早發(fā)生腫瘤，而野生型PTE

3、N過表達則抑制了乳腺發(fā)育。PTEN+/-小鼠可自發(fā)乳腺癌，并且PTEN+/-小鼠與MMTV-wnt-1轉(zhuǎn)基因小鼠雜交后代發(fā)生乳腺癌比親代種系要早。在乳腺腫瘤標本中PTEN突變或雜合性丟失(loss of heterozygosity，LOH)較為常見。有報道野生型PTEN通過下調(diào)PI3K水平誘導G1期阻滯促進細胞凋亡，從而抑制了乳腺癌細胞生長并引起細胞死亡。
　　 目前對PTEN的表達、信號傳導及在多種腫瘤中的地位和作用的研究正

4、方興未艾。進一步研究PTEN基因在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其機制以及與其他相關基因的相互作用，對于在基因水平上進行乳腺癌的診斷、治療及預后判斷具有重要的臨床意義。
　　 基于以上理念，為探討PTEN基因在乳腺癌細胞中的表達及對細胞生物學行為特性的影響，我們設計并進行了如下實驗研究：選擇PTEN正常表達的細胞株MDA-MB-231(M231)，使用ShRNA方法沉默PTEN的表達，構(gòu)建成PTEN低表達的M231細胞株(M231

5、-1548和M231-3001)及對照組細胞(M231-scramble)，通過Western-blot分析、細胞基質(zhì)黏附試驗、細胞侵襲能力分析和細胞克隆形成分析等方法檢測PTEN基因沉默后，M231乳腺癌細胞株黏附、遷移及增殖能力的改變。
　　 結(jié)果：與對照組(seramble-shRNA)相比，PTEN-shRNA1548和PTEN-shRNA3001可明顯地沉默PTEN基因的表達，從而構(gòu)建成PTEN低表達的M231細胞株（

6、M231-1548和M231-3001）。而且PTEN表達低的細胞（M231-1548和M231-3001)粘附率明顯低于實驗對照組(M231-scramble)，在相同的時間侵入并跨越基質(zhì)膜的能力更高，在三維膠內(nèi)繁殖增生、形成克隆的能力較對照組細胞(M231-scramble)明顯，兩者差異均有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.Ol)。
　　 結(jié)論：PTEN基因表達降低可促進細胞增生、繁殖和存活，降低細胞黏附力，促進細胞遷移和侵襲。因