密蒙花方對高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Mǔller細(xì)胞損傷的防護(hù)作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的：
　　本課題以大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為研究對象，從離體細(xì)胞研究層面，研究中藥密蒙花方對高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，闡明其作用機(jī)理，為密蒙花方防治早期糖尿病視網(wǎng)膜病變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　采用大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，在30mmol/L高糖下培養(yǎng)48h，模擬高糖環(huán)境，作為模型組，再給予20％含密蒙花方血清(以下均稱含藥血清)干預(yù)12h、24h、36h作為實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行

2、以下研究：
　　1.采用CCK-8法觀察密蒙花方對高糖狀態(tài)下大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞增殖的影響。
　　2.采用流式細(xì)胞儀Annexin V-FITC/PI雙色染色法觀察密蒙花方對高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞凋亡的影響。
　　3.采用免疫熒光法觀察密蒙花方對高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞內(nèi)GFAP，GS，GLAST，NMDA蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.CCK-8法檢測結(jié)果顯示：
　?、?/p>

3、高糖組較正常組吸光度值增高，具有統(tǒng)計(jì)意義(p<0.05)。10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L濃度組吸光值與正常組相比，明顯提高(p<0.05)，且呈濃度依賴性。40mmol/L、50mmol/L、60mmol/L濃度組吸光值與30mmol/L組相比明顯降低(p<0.05)。
　　②含藥血清干預(yù)12h時(shí)，20％、40％濃度組吸光值與高糖組相比，明顯降低(p<0.05)。含藥血清干預(yù)24h時(shí)，10％、20％、40％濃

4、度組吸光值與高糖組相比，明顯降低(p<0.05)；含藥血清干預(yù)36h時(shí)，5％、10％、20％、40％濃度組吸光值與高糖組相比，明顯降低，差異顯著p<0.05?？瞻籽褰M與高糖組比較，吸光值差異不顯著(p>0.05)。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：
　　高糖組較正常組細(xì)胞早期凋亡比例減少，活細(xì)胞比例增高，差異具有統(tǒng)計(jì)意義(p<0.01)：各含藥血清組與高糖組相比，細(xì)胞早期凋亡比例增高，活細(xì)胞比例減少(p<0.05)。

5、>　　3.免疫熒光結(jié)果顯示：
　?、貵FAP蛋白表達(dá)：正常情況下Muller細(xì)胞不表達(dá)或少量表達(dá)GFAP，在高糖刺激下GFAP表達(dá)增強(qiáng)，細(xì)胞連接緊密成網(wǎng)狀，線條清晰，分布由細(xì)胞膜向細(xì)胞核內(nèi)彌散。含藥血清干預(yù)12h，24h，36h后GFAP表達(dá)逐漸降低。
　?、贕S蛋白表達(dá)：高糖組較正常組細(xì)胞內(nèi)GS表達(dá)明顯降低，細(xì)胞連接斷裂，間隙增大，線條模糊，分布趨于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜。含藥血清處理12h、24h、36h，GS表達(dá)明顯升高，線條

6、逐漸清晰，細(xì)胞間隙縮小。
　　③GLAST蛋白表達(dá)：高糖組較正常組GLAST表達(dá)明顯下降，線條模糊，細(xì)胞間隙形成，分布近細(xì)胞膜處。含藥血清干預(yù)12h、24h、36h，使GLAST表達(dá)明顯增強(qiáng)，細(xì)胞連接逐漸緊密，線條清晰，恢復(fù)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
　?、躈MDA蛋白表達(dá)：高糖組較正常組NMDA表達(dá)明顯增強(qiáng)，線條清晰，細(xì)胞連接緊密，細(xì)胞間隙減小，呈網(wǎng)狀排列，分布趨于細(xì)胞膜和胞質(zhì)。經(jīng)含藥血清干預(yù)后，表達(dá)逐漸減弱，線條較模糊，細(xì)胞連接斷裂，縫