四株人胚胎干細(xì)胞系造血分化潛能的比較.pdf

1、人類胚胎干細(xì)胞（hESCs）是來(lái)源于著床前囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)能在長(zhǎng)期培養(yǎng)中無(wú)限增殖并保持未分化狀態(tài)，且具有分化成人體組織各種細(xì)胞類型能力的細(xì)胞。hESCs能為細(xì)胞移植治療提供細(xì)胞來(lái)源，也可作為研究個(gè)體發(fā)生發(fā)育的工具。近來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道每株hESCs都有自己獨(dú)特的轉(zhuǎn)錄模式，并且在增殖時(shí)間、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、長(zhǎng)期培養(yǎng)中的穩(wěn)定性、自發(fā)分化模式及X失活狀態(tài)等方面均可能存在很大差異。本研究中，通過(guò)流式檢測(cè)、基因表達(dá)和集落培養(yǎng)等方法分別比較了在自發(fā)分化和造血誘導(dǎo)分

2、化條件下本實(shí)驗(yàn)室建立的四株hESCs系（chHES-8，XY，chHES-22，XY，chHES-32，孤雌，chHES-137，XX）向造血分化的能力，以篩選出具有較大造血分化潛能的hESCs，進(jìn)行后續(xù)的造血分化研究。 第一部分 比較四株hESCs系造血分化潛能。 目的：比較在自發(fā)分化和誘導(dǎo)分化的條件下四株hESCs系（chHES-8，chHES-22，chHES-137，chHES-32）向造血分化的潛能。

3、方法： 1、EB自發(fā)分化12天，消化成單細(xì)胞懸液后，流式檢測(cè)KDR、CD34和CD45陽(yáng)性率；RT-PCR檢測(cè)GATA-1、GATA-2、SCL和Runxl的表達(dá)水平；造血集落培養(yǎng)； 2、EB誘導(dǎo)分化12天，消化成單細(xì)胞懸液后，流式檢測(cè)glycophorin-A、CD34和CD45陽(yáng)性率；RT-PCR檢測(cè)GATA-1、GATA-2、SCL和Runxl的表達(dá)水平： 3、將誘導(dǎo)分化12天的EBs，轉(zhuǎn)至用Matrige

4、l包被的12孔板貼壁培養(yǎng)7天，用胰酶消化后收集黏附和非黏附的細(xì)胞接種于MethoCultSFH4436半固體造血集落培養(yǎng)基中做造血集落培養(yǎng)。 結(jié)果：chHES-22向造血分化的潛能最大。 第二部分 hESCs向成血成血管細(xì)胞誘導(dǎo)分化的初步研究。 目的：誘導(dǎo)chHES-22向成血成血管細(xì)胞分化。 方法：收集在ModifiedTeSRTM1培養(yǎng)的未分化的hESCs克隆，在含50ng/mlBMP-4和50ng/

5、mlVEGF的STEMPR0-34SFM培養(yǎng)。3.5天時(shí)，消化EBs成單細(xì)胞懸液，接種在在含多種細(xì)胞因子的半固體培養(yǎng)基（BGM）中培養(yǎng)原始集落形成細(xì)胞。 結(jié)果：chHES-22在BGM培養(yǎng)體系中可形成葡萄串樣的原始細(xì)胞集落，每4×104個(gè)EB來(lái)源的細(xì)胞可形成26個(gè)集落。 總結(jié)： 1、通過(guò)流式檢測(cè)、基因表達(dá)和集落培養(yǎng)等方法比較了在自發(fā)分化和造血誘導(dǎo)分化條件下四株hESCs系向造血分化的潛能，篩選出具有較大造血分化潛