gateway技術

1、Gateway技術提供以下可能：通過去除冗長的亞克隆步驟節(jié)省您的時間同時將您的基因轉移到多個表達系統在任何您選擇的系統――體外，細菌，酵母，昆蟲，或哺乳動物――分析表達一、一種更好的克隆方法一、一種更好的克隆方法Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統（圖1）。這項強大的體外技術大大地簡化了基因克隆和亞克隆的步驟，而同時典型的克隆效率高達95%或更高。當基因在目的表達載體之間快速簡便的穿梭時，還可以保證正確的方向和

2、閱讀框。Gateway也有助于進行帶不同數目純化和檢測標簽蛋白的表達。圖1Gateway技術的靈活性Gateway技術：克隆、表達新方法zhchyuan2008zhchyuan2008的博客目的基因克隆進入門載體后，可以同時轉移目的基因到多個目的載體。Gateway利用了位點特異重組，所以在構建入門載體后，不再需要使用限制性完成構建Gateway表達克隆僅需兩步（圖2）：（1）創(chuàng)建入門克隆，通過PCR或傳統的克隆方法將目的基因克隆進入門

3、載體。（2）混合包含目的基因的入門克隆和合適的目的載體以及GatewayLRClonase酶，構建表達克隆。（表達克隆用來在合適的宿主中進行蛋白的表達和分析。）有幾種方法可以構建Gateway入門克隆。無論您選擇何種方法，創(chuàng)建的入門克隆都是準備用來與各種目的載體進行重組。（1）PCR克隆（定向TOPO克隆至入門載體或與供載體BP重組）（2）限制性內切酶消化和連接進入入門載體（3）使用pCMVSPT6或pEXPAD502構建Gateway

4、兼容cDNA文庫（4）Gateway改造過的克隆資源這些克隆資源和cDNA文庫兩邊加有attB位點。這些克隆可以通過與供載體及BPGateway酶反應轉換到入門載體。獲得已有克隆資源的更多信息。三、三、PCRPCR定向（定向（PCRDirectionalPCRDirectional）TOPOTOPO克隆克隆定向TOPO克隆使得克隆PCR產物和其它的DNA分子更加快速和有效。進行5分鐘的簡單連接，產生90%的重組子。您不僅會比用連接酶介導

5、的方法更快的獲得克隆，而且可以節(jié)省因第一次無結果而重復試驗所額外浪費的時間。定向TOPO克隆提供高效的一步法克隆策略，可以定向克隆平端PCR產物到入門載體。平端PCR產物定向克隆的效率90%，從而簡化了篩選。同時不再需要連接酶、PCR后續(xù)步驟或者限制性內切酶。目前有兩種定向TOPO克隆載體。pENTRDTOPO和pENTRSDDTOPO（表2和圖3）有以下特點：位于PCR產物插入位點兩側的attL重組位點可以與Gateway目的載體進行