基于細胞凋亡探討烏梅丸治療潰瘍性結腸炎的作用機制.pdf

1、目的:通過觀察烏梅丸對潰瘍性結腸炎大鼠結腸上皮細胞凋亡的影響，并檢測與細胞凋亡關系密切的Caspase-3、Fas、FasL、Bcl-2、Bax蛋白的表達，以探討烏梅丸治療潰瘍性結腸炎的作用機制，以期明確烏梅丸的作用靶點，為烏梅丸的臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:將50只SD大鼠，隨機分成5組:空白對照組、UC模型組、UC+烏梅丸大劑量組、UC+烏梅丸中劑量組、UC+烏梅丸小劑量組，每組10只。除空白組外，余行潰瘍性結腸炎造模。

2、以50％的TNBS/乙醇溶液按100mg/kg劑量用注射器緩慢推入結腸，誘導潰瘍性結腸炎形成。從造模第4天起，空白對照組和UC模型組以10ml/kg劑量生理鹽水灌胃，烏梅丸大、中、小劑量組分別以53.2g/kg、26.6g/kg、13.3g/kg劑量烏梅丸灌胃處理，各組大鼠連續(xù)灌胃10天后處死。ELISA法檢測Caspase-3的表達，TUNEL法檢測結腸上皮細胞凋亡，Q-PCR法檢測結腸上皮細胞Fas、FasL的表達，免疫組織化學法檢

3、測結腸上皮細胞Bcl-2、Bax的表達。通過分析烏梅丸對上述各項指標的影響，探討其對潰瘍性結腸炎的作用機制。
　　結果:(1)大鼠一般狀態(tài):空白組大鼠狀態(tài)顯著優(yōu)于模型組大鼠，烏梅丸大、中、小劑量組用藥10天后均能明顯改善大鼠的各項體征，其中以烏梅丸大、中劑量組大鼠扎堆、發(fā)抖、喜靜懶動等情況明顯改善，烏梅丸小劑量組仍有上述現(xiàn)象。
　　(2)病理組織學觀察:模型組大鼠結腸黏膜表面起伏不平，可見潰瘍面形成或黏膜大面積缺損，結腸充血

4、、水腫，大量炎性細胞浸潤，腺體萎縮或消失，杯狀細胞排列紊亂。給藥治療后，烏梅丸大、中劑量組病理改變明顯減輕，烏梅丸小劑量組仍可見大量炎性細胞浸潤。
　　(3)Caspase-3蛋白的含量:與空白組比較，模型組大鼠結腸上皮caspase-3含量顯著增強(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組有顯著性差異(P＜0.01)，烏梅丸小劑量組有差異(P＜0.05);與烏梅丸大劑量組比較，烏梅丸中劑量組有差異(P＜0.0

5、5)，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(4)Fas、FasL蛋白表達水平:與空白組比較，模型組大鼠結腸上皮細胞Fas和FasL表達顯著增強(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組、烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01);與烏梅丸大劑量組比較，烏梅丸中劑量組有差異(P＜0.05)，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(5)Bcl-2、Bax蛋白表達水平:與空白組比較，模

6、型組大鼠結腸上皮細胞Bcl-2蛋白表達明顯減弱，Bax蛋白的表達顯著增強(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01);與烏梅丸大劑量組比較，烏梅丸中劑量組有差異(P＜0.05)，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(6)結腸上皮細胞凋亡情況:與空白組比較，模型組大鼠結腸上皮凋亡細胞顯著增多(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組、烏梅