α-地中海貧血分子診斷、非侵入性產(chǎn)前檢測21-三體的探索研究.pdf

1、分子診斷在遺傳性和先天性疾病的診斷中起到越來越為重要的作用。本研究以我國南方高發(fā)的α-地中海貧血與人類胎兒常見的21-三體綜合征為研究目標(biāo)，建立簡便、準(zhǔn)確與快速的診斷方法與探索非侵入性檢測方法。
　　α-地中海貧血分子診斷研究包括多種PCR分析方法的建立和驗(yàn)證，以及新發(fā)現(xiàn)大缺失類型的定位及分析。本研究首先建立運(yùn)用兩管裂口PCR結(jié)合DHPLC或DC分析、單管長度不同PCR結(jié)合DHPLC或DC分析、單管PCR結(jié)合DHPLC分析分別進(jìn)行

2、-α4.2/與-α3.7/的檢測，單管雙重PCR結(jié)合DC或DHPLC分析進(jìn)行--SEA/的檢測，單管雙重PCR結(jié)合DHPLC分析進(jìn)行三種點(diǎn)突變?chǔ)罜Sα/、αQSα/和αWSα/的檢測，改良雙聚寡核苷酸引物系統(tǒng)PCR/DC法進(jìn)行兩種點(diǎn)突變?chǔ)罜Sα/和αQSα/的檢測，并通過方法搭配聯(lián)合對163份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示除單管長度不同PCR法的敏感度與特異性稍低外，其他方法檢測結(jié)果均與臨床現(xiàn)行方法相符。這些分子檢測方法可用于檢測α-地中海

3、貧血常見缺失與點(diǎn)突變，并且快速準(zhǔn)確經(jīng)濟(jì)，適用于臨床篩查和檢測。其次，利用MLPA技術(shù)鑒定出一種新的大缺失類型α-地中海貧血，并運(yùn)用熒光定量PCR方法對該缺失斷裂位點(diǎn)進(jìn)行了分析和定位，且檢出了家系成員中的攜帶者。
　　以母體外周血中胎兒特異表達(dá)的PLAC4 mRNA為目標(biāo)，探索研究了在懷有正常胎兒與21-三體胎兒母體外周血漿中表達(dá)量的差異和SNP位點(diǎn)等位基因比率的不同。本研究首先采用一步熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR方法，測定中孕期孕婦外周血

4、漿中的PLAC4 mRNA的濃度及相對量，結(jié)果顯示，懷有21-三體胎兒（5例）與懷有正常胎兒（18例）的兩組孕婦之間的PLAC4 mRNA濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.141)，相對定量有顯著性差異(P=0.011)。因此檢測中孕期孕婦外周血漿中PLAC4 mRNA相對量是非侵入性產(chǎn)前檢測21-三體的一個(gè)候選途徑。其次，利用設(shè)計(jì)合成的MPLA探針組裝，檢測了北京地區(qū)漢族人群多個(gè)SNP位點(diǎn)的基因頻率，為利用MLPA技術(shù)進(jìn)行非侵入性產(chǎn)前檢測胎兒