廣州地區(qū)α-地中海貧血的新生兒篩查及高分辨率熔解曲線分析技術(shù)在非缺失型α-地中海貧血篩查中的應(yīng)用.pdf

1、α-地中海貧血(α-thalassemia，α-地貧)是α-珠蛋白基因缺失或突變使α-珠蛋白鏈的合成受到抑制而引起的遺傳性溶血性貧血，是人類最常見且危害最大的單基因遺傳病之一，在我國主要集中在南方地區(qū)，廣州是α-地貧的高發(fā)區(qū)。正常人有4個α基因，若4個α-基因都缺失(Hb Bart’s水腫胎)，胎兒一般在妊娠晚期或出生后數(shù)小時死亡。另外，一些非缺失型Hb H病和非缺失型α-地貧純合子患者貧血嚴(yán)重，甚至需要輸血治療。靜止型和輕型α-地貧基

2、因攜帶者自身無臨床表現(xiàn)，但可能生育重型地貧的胎兒，因此，在α-地貧高發(fā)區(qū)進(jìn)行人群篩查尤為必要。已有研究發(fā)現(xiàn)臍血中的Hb Bart’s與α-地貧直接相關(guān)，本研究應(yīng)用全自動毛細(xì)管電泳技術(shù)(Sebia Capillarys2)對臍血進(jìn)行Hb Bart’s定量，探討其篩查α-地貧的效果。另外，近年來興起的一種遺傳學(xué)分析方法——高分辨率熔解曲線技術(shù)(HRM技術(shù))，用于基因突變掃描、基因分型等具有簡單、快速、低成本等優(yōu)點(diǎn)，本研究探討HRM技術(shù)用于篩

3、查非缺失型α-地貧的可行性。
　　一、目的
　　1.調(diào)查廣州地區(qū)α-地貧的基因攜帶率及基因型頻率。
　　2.探討新生兒臍血Hb Bart’s水平與α-地貧類型的關(guān)系。
　　3.探討高分辨率熔解曲線技術(shù)(HRM技術(shù))用于篩查非缺失型α-地貧的可行性，建立一種快速、簡便、廉價的非缺失型α-地貧分子篩查方法。
　　二、方法
　　1.收集2010年5月至2011年7月我院產(chǎn)科分娩的6525例新生兒臍帶血。

4、r>　　2.應(yīng)用全自動毛細(xì)管電泳技術(shù)對6525例新生兒臍血進(jìn)行Hb Bart’s定量。
　　3.采用gap-PCR技術(shù)檢測所有Hb Bart’s陽性樣本和隨機(jī)抽取的100例Hb Bart’s陰性樣本α-地貧的3種常見缺失(--SEA、-α3.7、-α4.2)。
　　4.對gap-PCR技術(shù)未檢出異常，但Hb Bart’s％≧2%的樣本，用一種快速可靠的多重PCR檢測四種缺失(--THAI，--FIL，--MED，-(α)20

5、.5)。
　　5.對gap-PCR和多重PCR技術(shù)均未檢測出異常的Hb Bart’s%≤2.5%的樣本，用HRM技術(shù)篩查α-珠蛋白基因的第三外顯子。
　　6.用反向點(diǎn)雜交(RDB)技術(shù)檢測上述樣本的3種常見非缺失型α-地貧基因(αCSα、αQSα和αWSα)。
　　7.對于用以上方法均未知基因型的樣本，用HRM技術(shù)篩查α-基因的第一、二外顯子。
　　8.用PCR產(chǎn)物直接測序法檢測上述樣本的α1-和α2-珠蛋白基因

6、全長。
　　三、結(jié)果
　　1.在6525例新生兒臍帶血樣本中，檢出Hb Bart’s陽性樣本377例(陽性檢出率為5.78%)，其中375例經(jīng)基因分析確診為α-地貧。本研究中共檢出14種α-地貧基因型375例(含384個α-地貧等位基因)，α-地貧基因攜帶率為5.89%。其中東南亞缺失型(--SEA)基因攜帶率為4.03%，αCSα、αQSα基因攜帶率分別為0.18%、0.15%。
　　2.臍血Hb Bart’s的含量

7、與α-基因缺陷(缺失或突變)的個數(shù)相關(guān)：1、2、3個α-基因缺陷的Hb Bart’s含量分別為0.55%±0.29%、3.54%±0.79%和20.27%±1.72%。
　　3.隨機(jī)抽取的100例Hb Bart’s陰性樣本中，檢出1例-α3.7/αα。
　　4. HRM技術(shù)篩查非缺失型α-地貧的敏感性和特異性均達(dá)100%。
　　5.通過用PCR產(chǎn)物直接測序法檢測α1-和α2-珠蛋白基因的全長，檢出5例4種非缺失型α-地

8、貧，其中2種是人群中沒有報道的新發(fā)突變。
　　四、結(jié)論
　　1.證實(shí)了廣州地區(qū)是α-地貧的高發(fā)區(qū)。
　　2.以臍血Hb Bart’s陽性為指標(biāo)，對新生兒進(jìn)行α-地貧篩查，能準(zhǔn)確地篩查出HbH病、α0地貧及αCSα/αα，但是，Hb Bart’s水平不宜作為αCSα以外的α+-地貧的篩查指標(biāo)。
　　3.毛細(xì)管電泳Hb Bart’s定量，準(zhǔn)確、高效，可應(yīng)用于新生兒α-地貧的篩查。
　　4. HRM技術(shù)能準(zhǔn)確篩查