白蛋白、異體血漿對人體天然免疫反應(yīng)的影響.pdf

1、研究背景： 液體復(fù)蘇是ICU內(nèi)危重病患者重要的治療手段之一。在復(fù)蘇液的選擇上，是用晶體液還是膠體液，選用何種膠體液的分歧一直延續(xù)了數(shù)十年。2004年具有代表性的SAFE研究結(jié)果證實，選用白蛋白或生理鹽水對ICU內(nèi)非同類患者進(jìn)行液體復(fù)蘇，臨床效果相當(dāng)。盡管這一研究得到了加拿大哈密爾頓麥克馬斯特大學(xué)的Deb．orah Cook博士等的高度評價，認(rèn)為SAFE研究不僅是臨床試驗的新經(jīng)典，更可堪稱為危重病學(xué)發(fā)展歷程上的重要里程碑?？杀M管如

2、此，在隨后的研究中，對ICU內(nèi)液體種類的選擇仍得出了不同的結(jié)論。 新鮮冰凍血漿和白蛋白是ICU內(nèi)常用的液體種類，研究表明，在臨床治療中，普遍存在新鮮冰凍血漿及白蛋白濫用的情況。我們不禁要問，白蛋白和新鮮冰凍血漿對機(jī)體究竟有怎樣的影響?目前，以患者為試驗對象的大樣本隨機(jī)對照試驗，難度很大，難以實施。因此，我們考慮可否通過另外的方法比較白蛋白、血漿、生理鹽水各自復(fù)蘇的特點。 多器官功能障礙綜合征(MODS)是當(dāng)今ICU內(nèi)危重

3、病人死亡的主要原因之一，MODS若不能及早逆轉(zhuǎn)，可能進(jìn)一步發(fā)生多器官功能衰竭(MOF)，病死率高達(dá)50％-90％。國內(nèi)外學(xué)者曾對MODS的發(fā)病機(jī)制提出各種學(xué)說，隨著現(xiàn)代免疫學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展，免疫失衡學(xué)說在當(dāng)前受到日益重視，認(rèn)為免疫失衡在MODS發(fā)生發(fā)展中占有重要地位。研究表明通過抑制全身免疫反應(yīng)并提高天然免疫機(jī)制功能可達(dá)到免疫平衡。 隨著依據(jù)系統(tǒng)論觀點建立的新的實驗研究體系--全血自然實驗研究體系已非常完善，它通過模擬體內(nèi)

4、自然狀態(tài)來研究天然免疫反應(yīng)的方法，被認(rèn)為設(shè)計合理、客觀，近似體內(nèi)自然狀態(tài)。因此，可以將可反應(yīng)天然體液免疫功能變化的重要指標(biāo)，補(bǔ)體C3、C4及紅細(xì)胞表面重要標(biāo)志CD55作為研究指標(biāo)，用全血自然實驗研究體系，從天然免疫反應(yīng)的角度探討不同補(bǔ)液種類對機(jī)體的影響，從而為臨床補(bǔ)液種類的選擇提供參考。 研究目的： (一)、在自然體系下，研究生理鹽水、白蛋白、異體血漿對補(bǔ)體C3、C4的影響。 (二)、在自然體系下，研究生理鹽水、

5、白蛋白、異體血漿對紅細(xì)胞表面物質(zhì)CD55的影響。 研究方法： 第一部分補(bǔ)體C3、C4的變化 25例成年健康男性，各取全血4ml，加入枸櫞酸400ul抗凝，在室溫下離心，2500轉(zhuǎn)，5min，取上層血漿置另一試管，用生理鹽水恢復(fù)為等體積。每例標(biāo)本分四組，第一組為異體血漿組，加入全血細(xì)胞0.4ml，自體血漿0.6ml，異體血漿0.4ml；第二組為白蛋白組，加入全血細(xì)胞0.4ml，自體血漿0.6ml，白蛋白0.4ml；

6、第三組為生理鹽水組(陰性對照組)，加入全血細(xì)胞0.4ml，自體血漿0.6ml，生理鹽水0.4ml；第四組為細(xì)菌組(陽性對照組)，加入全血細(xì)胞0.4ml，自體血漿0.6ml，大腸桿菌懸液0.4ml。搖晃混勻后在37℃下水浴1小時，室溫下離心，2000轉(zhuǎn)，5min，取上層液體測補(bǔ)體C3、C4。以SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，用Student-newman-keuls分析各組間C3、C4的差異。0＜0.05為差異有顯著意義。

7、 第二部分紅細(xì)胞表面物質(zhì)CD55的變化 實驗對象選擇同第一部分，取上述過程中離心后的下層細(xì)胞測紅細(xì)胞CD55。用紅細(xì)胞分子標(biāo)記物(CD55)抗體與其相互結(jié)合，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢驗，根據(jù)分子標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的變化來判斷紅細(xì)胞上CD55表達(dá)的變化，以SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以激活率和x±s表示，激活率為(實驗組或陽性對照組-陰性對照組)÷陰性對照組，用Paried Sample Test檢驗異體血漿和白蛋白激活率的差異，p＜0

8、.05為差異有顯著意義，用Student-newman-keuls分析各組間紅細(xì)胞上CD55熒光強(qiáng)度的變化。 研究結(jié)果： 第一部分 四組補(bǔ)體C3分別為：異體血漿組(0.6983±0.16361)，白蛋白組(0.5486±0.15072)生理鹽水組(0.5335±0.15066)，細(xì)菌組(0.4317±0.14126)。異體血漿組C3含量顯著高于生理鹽水組，顯著高于細(xì)菌組，顯著高于白蛋白組，p值均小于0.05，白蛋

9、白組C3含量顯著高于細(xì)菌組，p值小于0.05，高于生理鹽水組，但無統(tǒng)計學(xué)意義，p值大于0.05。 四組補(bǔ)體C4分別為：異體血漿組(0.1089±0.1640)，白蛋白組(0.1186±0.16767)生理鹽水組(0.1182±0.16149)，細(xì)菌組(0.0856±0.1378)。但F=0.440，P=0.725，各組間C4含量兩兩間無差異。 第二部分 異體血漿組和白蛋白組紅細(xì)胞CD55的激活率無統(tǒng)計學(xué)易于(p=

10、0.888)。各組紅細(xì)胞CD55平均熒光強(qiáng)度分別為：異體血漿組(13.7792±1.95611)白蛋白組(13.7032±1.53900)，生理鹽水組(12.1056±1.26006)，細(xì)菌組(16.0932±2.19021)。異體血漿組、白蛋白組、生理鹽水組、細(xì)菌組C4含量兩兩間無差異均顯著高于陰性對照組，顯著低于陽性對照組(p值均小于0.05)，異體血漿紅細(xì)胞CD55的表達(dá)高于白蛋白組，但無統(tǒng)計學(xué)意義(p值大于0.05)。異體血漿組

11、和白蛋白組紅細(xì)胞CD55的表達(dá)均顯著高于生理鹽水組，顯著低于細(xì)菌組(p值均小于0.05)，異體血漿紅細(xì)胞CD55的表達(dá)高于白蛋白組，但無統(tǒng)計學(xué)意義(p值大于0.05)。 研究結(jié)論： 1．新鮮冰凍血漿和白蛋白相比，更可顯著增加體內(nèi)補(bǔ)體的含量，這種增加可能是因為異體血漿內(nèi)含有補(bǔ)體成分，也有可能是異體血漿通過激活天然免疫反應(yīng)而引起。 2．細(xì)菌組補(bǔ)體水平下降可再次證明在人血循環(huán)中存在對抗致病原的系統(tǒng)血液快速固有免疫反應(yīng)，

12、致病原在血漿中可被補(bǔ)體系統(tǒng)識別。 3．盡管CD55可通過加速C3轉(zhuǎn)化酶的衰變對補(bǔ)體C3發(fā)生作用，但白蛋白組和細(xì)菌組CD55的表達(dá)均較生理鹽水組增加，而他們各自的C3水平和生理鹽水組比較，一個是無顯著差異的，一個是顯著減少的，這一結(jié)果可說明在體內(nèi)有多種途徑影響C3的含量，紅細(xì)胞膜上的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55對C3的作用較小。 4．單從天然免疫反應(yīng)的角度來看，和生理鹽水相比較，新鮮冰凍血漿和白蛋白均可調(diào)節(jié)患者的免疫功能。當(dāng)患者補(bǔ)