27068.mirna在lps活化天然免疫反應(yīng)中的表達(dá)、調(diào)控作用研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文miRNA在LPS活化天然免疫反應(yīng)中的表達(dá)、調(diào)控作用研究姓名：牛玉娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：陳瑤生20100601中山大學(xué)博士學(xué)位論文牛玉娜比較SIRS小鼠與對(duì)照小鼠脾臟微小RNA(miRNA)表達(dá)譜，獲得LPS效應(yīng)miRNA基因；其次，結(jié)合miRNA靶基因預(yù)測(cè)和表達(dá)譜分析確定對(duì)LPS所引起的炎癥反應(yīng)有調(diào)節(jié)作用的基因microRNA1224(miR1224)。然后檢測(cè)了miR1224對(duì)炎性基因TNF0

2、【、ILlD生成，以及對(duì)NFrB轉(zhuǎn)錄活性的作用，以驗(yàn)證miR1224是否參與了LPS／TLR4信號(hào)通路和對(duì)炎性基因生成的影響。最后，檢測(cè)了miR1224對(duì)靶基因偶聯(lián)熒光素酶活性、靶基因表達(dá)的干擾作用，探討111iR1224對(duì)LPS／TLR4信號(hào)通路調(diào)控作用的分子機(jī)制。(1)成功構(gòu)建內(nèi)毒素所致小鼠SIRS模型。采用腹腔注射LPS的方法，誘使小鼠出現(xiàn)SIRS／MODS癥狀。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，SIRS小鼠肝、脾、肺、腎均可見充血水腫、炎

3、性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織結(jié)構(gòu)壞死。與對(duì)照相比，SIRS小鼠肝、脾、肺、腎中TLR4、IL1p和TNFa基因表達(dá)量在注射后6h、12好、均發(fā)生明顯改變。TLR4基因在脾、肺中表達(dá)量呈現(xiàn)震蕩升高的趨勢(shì)，mRNA水平在6h下降后，12h后都顯著升高(P005)，尤其在肺中，TLR4的表達(dá)量上升了645％。相對(duì)脾、肺，TLR4在肝中表達(dá)量不高，但當(dāng)LPS刺激6h后，其mRNA水平上升459％。IL113在肝、脾、肺中表達(dá)量都急劇上升。在LPS刺激后6h

4、和12h，IL113在肝中表達(dá)量分別上升568倍和131倍，而在脾上IL1D水平呈現(xiàn)先高后低的事態(tài)：6h后生生369倍，12h后下降至658％。IL113在LPS刺激后的肺中表達(dá)則呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)：在6h后，IL—lD水平下降至檢測(cè)極限，而12h后又較之對(duì)照上升439倍。在應(yīng)答LPS刺激過程中，其在這四個(gè)組織中表達(dá)呈現(xiàn)不同趨勢(shì)。LPS刺激后，TNFa在肝中表達(dá)持續(xù)下降，至12h時(shí)下降超過50％；在脾上，6h后達(dá)到高峰，12h下降低

5、于對(duì)照水平；而在肺中，TNFa基因持續(xù)上升，12h上升79倍。(2)獲得19個(gè)LPS效應(yīng)miRNA，畫出miRNAmRNA相互作用圖，網(wǎng)絡(luò)解析miRNA在應(yīng)答LPS刺激過程作用及潛在的分子機(jī)制。使用microRNA表達(dá)譜芯片比較LPS注射小鼠和對(duì)照小鼠的脾臟的miRNA表達(dá)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在LPS注射小鼠脾臟中有19個(gè)miRNA表達(dá)量上調(diào)。其中miR146b、miR155、miR494和miR1224最大變化倍數(shù)分別為16l、275、41