瀘州市兒童β地中海貧血基因突變類型研究.pdf

1、目的:地中海貧血是由于血紅蛋白基因的突變導致珠蛋白鏈的合成不平衡所造成的一類常見的單基因遺傳性、溶血性疾病，包括α地中海貧血和β地中海貧血兩種類型，是世界上最常見和發(fā)病率最高的遺傳性溶血性貧血，也是危害最嚴重的血紅蛋白病之一。在國外以地中海沿岸國家和東南亞各國多見，我國以廣東、廣西、海南、四川等?。ㄗ灾螀^(qū)）較常見。本病具有高度的遺傳異質(zhì)性和極大的地域民族差異，不同地區(qū)人群的發(fā)病率和基因背景差異均很大，因此，研究這些變化特征可為本病的預防

2、及診斷提供科學依據(jù)。本課題通過了解瀘州市β地中海貧血的基因突變類型及構(gòu)成比，為本地區(qū)地中海貧血的診斷和預防提供理論依據(jù)，同時探討基因診斷在地中海貧血中的重要作用。
　　方法:1.全部病例來源為2011年1月至2013年6月在瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院兒科門診（包括兒保門診）及住院部就診兒童。2.所有病例均進行血常規(guī)檢查，篩查出的血紅蛋白(Hb)＜110g/L，紅細胞平均容積(MCV)＜80fl或紅細胞平均血紅蛋白(MCH)＜27pg的小細

3、胞低色素貧血患兒，進一步做血紅蛋白電泳檢測。3.血紅蛋白電泳檢測結(jié)果中判為β地中海貧血表型陽性者，即MCV＜80％，HbA2＞3.2％或HbF＞3.1％，進行β地貧基因檢測。4.用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合反向斑點雜交技術(reverse dot blot，RDB)檢測常見β-珠蛋白基因上的17個位點突變，包括CD41-42(-TTCT)、 IVS-Ⅱ-654(C＞T)、-28(A＞G

4、)、 CD71-72(+A)、 CD17(AAG＞TAG)、βE(GAG→AAG)、 CD31(-C)、CD43(GAG＞TAG)、-32(C＞A)、-29(A＞G)、-30(T＞C)、CD14-15(+G)、 CAP+40-43(-AAAC)、起始密碼子Int(ATG＞AGG)、CD27/28(+C)、 IVS-Ⅰ-1(G＞T)、IVS-Ⅰ-5(G＞C)。首先制備DNA標本，通過PCR擴增、雜交、洗膜等步驟，最后顯色觀察結(jié)果，膜條有藍

5、色雜交斑點為陽性結(jié)果。
　　結(jié)果:1.在進行地貧基因檢查的114例β-地貧表型陽性兒童中，檢測到β地貧基因突變者72例，占總檢測對象的63.16％。2.72例β-地貧中共檢出7種基因突變位點，分別為CD41-42(-TTCT)、 IVS-Ⅱ-654(C＞T)、 CD17(AAG＞TAG)、-28(A＞G)、 CD71-72(+A)、β E(GAG→AAG)、-32(C＞A)。其中以CD17(AAG＞TAG)、 IVS-Ⅱ-654(

6、C＞T)、CD41-42(-TTCT)3種基因型最為常見，占90.22％。3.基因突變組成15種基因型，包括52例雜合子(72.22％)、13例雙重雜合子(18.05％)、3例三重雜合子(4.17％)和4例純合子(5.56％)。雜合子基因型分別為:CD17(27.78％)、 IVS-Ⅱ-654(22.22％)、 CD41-42(19.44％)和-28(2.78％)。雙重雜合子基因型分別為:IVS-Ⅱ-654/CD17(8.33％)、 C

7、D41-42/CD17(2.78％)、-28/CD17(1.39％)、 CD41-42/CD71-72(1.39％)、 CD41-42/βE(1.39％)、CD41-42/IVS-Ⅱ-654(1.39％)、CD41-42/-32(1.39％)。三重雜合子基因型分別為:IVS-Ⅱ-654+CD17/-32(2.78％)、 CD41-42+IVS-Ⅱ-654/-28(1.39％)。純合子基因型為:CD41-42/CD41-42(2.78％)